Meriv çawa konsantrasyona çêtirîn diyar dike?
Ji bo înduktera IPTG (îsopropîl-beta-d-tîyogalaktozîd), çiqas konsantrasyon bilindtir be, ewqas çêtir e. Konsantrasyona çêtirîn bi şert û mercên ceribandinê yên taybetî û bandora înduksîyonê ya xwestî ve girêdayî ye.
Bi gelemperî, rêjeya IPTG di navbera 0.1-1 mM de tê bikar anîn. Rêjeyên kêmtir dikarin bandorên neyînî li ser mezinbûna şaneyan kêm bikin û dikarin sîtotoksîsîteyê ji ber zêdeîfadekirina proteînên hedef kêm bikin. Rêjeyên bilindtir dikarin bibin sedema bargiraniya metabolîzma şaneyan a zêde, ku bandorê li mezinbûna şaneyan û karîgeriya îfadeyê bike.
Riya diyarkirina konsantrasyona çêtirîn dikare bi nirxandina asta îfadeya proteîna hedef bi rêya ceribandinên înduksîyona IPTG di konsantrasyonên cûda de be. Testên çandiniyê yên piçûk dikarin bi karanîna rêzek konsantrasyonên IPTG (mînak 0.1 mM, 0.5 mM, 1 mM, hwd.) werin kirin û bandora îfadeyê di konsantrasyonên cûda de dikare bi tespîtkirina asta îfadeya proteîna hedef (mînak tespîtkirina Western blot an fluoresansê) were nirxandin. Li gorî encamên ceribandinê, konsantrasyona bi bandora îfadeya çêtirîn wekî konsantrasyona çêtirîn hate hilbijartin.
Wekî din, hûn dikarin ji bo fêmkirina rêjeya giraniya IPTG-ê ya ku bi gelemperî di bin şert û mercên ceribandinê yên wekhev de tê bikar anîn, li wêjeya têkildar an ezmûna laboratîfên din jî binêrin, û dûv re li gorî hewcedariyên ceribandinê çêtir bikin û sererast bikin.
Girîng e ku were zanîn ku konsantrasyona çêtirîn dikare li gorî pergalên îfadeyê yên cûda, proteînên hedef û şert û mercên ceribandinê biguhere, ji ber vê yekê çêtirîn e ku li gorî her rewşê were çêtirkirin.
Dema weşandinê: 28ê Îlonê, 2023