Dîtîotrîtol (DTT) madeyek kêmker a ku bi gelemperî tê bikar anîn e, ku wekî lêzêdekera kesk a nû jî tê zanîn. Ew pêkhateyek organîk a molekulî ya piçûk e ku du komên merkaptan (-SH) hene. Ji ber taybetmendiyên xwe yên kêmker û aramiya xwe, DTT bi berfirehî di ceribandinên bîyokîmya û biyolojiya molekulî de tê bikar anîn.
Rola sereke ya DTT kêmkirina girêdanên dîsulfîd di proteîn û bîyomolekulên din de ye. Girêdana dîsulfîd beşek girîng a pêçandin û aramiya proteînê ye, lê di hin şert û mercên ceribandinê de, wekî analîza SDS-PAGE ya kêmkirî, ji nû ve kombînasyona proteîn û pêçandin, pêdivî ye ku girêdana dîsulfîd kêm bibe du komên tîol da ku avahiya fezayî ya proteînê were veşandin. DTT dikare bi girêdanên dîsulfîd re reaksiyonê bike da ku wan kêm bike komên merkaptan, bi vî rengî avahiya fezayî ya proteînê vedike û analîzkirin û manîpulekirina wê hêsan dike.
DTT dikare ji bo parastina çalakî û aramiya enzîmê jî were bikar anîn. Di hin reaksiyonên ku ji hêla enzîmê ve têne katalîzekirin de, çalakiya enzîmê dikare ji hêla oksîdantê ve were kêm kirin. DTT dikare bi oksîdantan re reaksiyonê bike da ku wan kêm bike bo madeyên bê zirar, bi vî rengî çalakî û aramiya enzîmê diparêze.
Li gorî kêmkerên kevneşopî yên wekî β-merkaptoetanol (β-ME), DTT wekî kêmkerek ewletir û stabîltir tê hesibandin. Ew ne tenê di çareseriya avî de stabîl e, lê di heman demê de taybetmendiyên xwe yên kêmker di bin germahiya bilind û şert û mercên asîdî-baz de jî diparêze.
Bikaranîna DTT nisbeten hêsan e. Bi gelemperî, DTT di tamponek guncaw de tê helandin û dûv re li pergala ceribandinê tê zêdekirin. Pêdivî ye ku rêjeya çêtirîn a DTT li gorî ceribandina taybetî were destnîşankirin, û bi gelemperî di navbera 0.1-1mM de tê bikar anîn. Rêjeyên kêmtir dikarin bandorên neyînî li ser mezinbûna hucreyan kêm bikin û dikarin sîtotoksîsîteyê ji ber zêde-îfadekirina proteînên hedef kêm bikin. Rêjeyên bilindtir dikarin bibin sedema bargiraniya metabolîk a hucreyê ya zêde, ku bandorê li mezinbûna hucreyan û karîgeriya îfadeyê bike.
Riya diyarkirina konsantrasyona çêtirîn dikare bi nirxandina asta îfadeya proteîna hedef bi rêya ceribandinên înduksîyona IPTG di konsantrasyonên cûda de be. Testên çandiniyê yên piçûk dikarin bi karanîna rêzek konsantrasyonên IPTG (mînak 0.1 mM, 0.5 mM, 1 mM, hwd.) werin kirin û bandora îfadeyê di konsantrasyonên cûda de dikare bi tespîtkirina asta îfadeya proteîna hedef (mînak tespîtkirina Western blot an fluoresansê) were nirxandin. Li gorî encamên ceribandinê, konsantrasyona bi bandora îfadeya çêtirîn wekî konsantrasyona çêtirîn hate hilbijartin.
Wekî din, hûn dikarin ji bo fêmkirina rêjeya giraniya IPTG-ê ya ku bi gelemperî di bin şert û mercên ceribandinê yên wekhev de tê bikar anîn, li wêjeya têkildar an ezmûna laboratîfên din jî binêrin, û dûv re li gorî hewcedariyên ceribandinê çêtir bikin û sererast bikin.
Girîng e ku were zanîn ku konsantrasyona çêtirîn dikare li gorî pergalên îfadeyê yên cûda, proteînên hedef û şert û mercên ceribandinê biguhere, ji ber vê yekê çêtirîn e ku li gorî her rewşê were çêtirkirin.
Bi kurtasî, DTT madeyek kêmker e ku bi gelemperî tê bikar anîn û dikare ji bo kêmkirina girêdanên dîsulfîd di proteîn û bîyomolekulên din de û ji bo parastina çalakî û aramiya enzîmê were bikar anîn. Ew bi berfirehî di ceribandinên bîyokîmya û biyolojiya molekulî de hatiye bikar anîn.
Dema weşandinê: 28ê Îlonê, 2023