Dithiothreitol (DTT) kêmkerek bi gelemperî tête bikar anîn, ku wekî pêveka kesk a nû jî tê zanîn.Ew pêkhateyek organîk a molekularî ya piçûk e ku bi du komên mercaptan (-SH) ve ye.Ji ber taybetmendiyên kêmkirin û aramiya xwe, DTT bi berfirehî di ceribandinên biyokîmya û biyolojiya molekular de tê bikar anîn.
Rola sereke ya DTT kêmkirina girêdanên disulfîdê di proteînan û biomolekulên din de ye.Girêdana dîsulfîdê parçeyek girîng a pêçandin û aramiya proteînê ye, lê di bin hin şert û mercên ceribandinê de, wek analîza SDS-PAGE-ya kêmkirî, ji nû vehevkirina proteînê û pêçandî, pêdivî ye ku girêdana disulfîdê li du komên tîol were kêm kirin da ku strukturên cîhê ji holê rakin. proteîn.DTT dikare bi bendên dîsulfîdê re reaksiyonê bike da ku wan li komên mercaptan kêm bike, bi vî rengî avahiya cîhê ya proteînê vedike û analîz û manîpulekirina wê hêsan dike.
DTT dikare ji bo parastina çalakiya enzîmê û aramiyê jî were bikar anîn.Di hin reaksiyonên katalîzasyona enzîmê de, dibe ku çalakiya enzîmê ji hêla oksîdantê ve kêm bibe.DTT dikare bi oksîdantan re reaksiyonê bike da ku wan berbi madeyên bêzerar kêm bike, bi vî rengî çalakî û aramiya enzîmê diparêze.
Li gorî ajanên kêmkirina kevneşopî yên wekî β-mercaptoetanol (β-ME), DTT wekî kargêrek kêmkirina ewledar û aramtir tê hesibandin.Ew ne tenê di çareseriya avî de stabîl e, lê di şert û mercên germahiya bilind û asîd-bazê de taybetmendiyên xwe yên kêmker jî diparêze.
Bikaranîna DTT nisbeten hêsan e.Bi gelemperî, DTT di tamponek guncan de tê hilweşandin û dûv re li pergala ceribandinê tê zêdekirin.Pêdivî ye ku giraniya herî baş a DTT li gorî ezmûna taybetî were destnîşankirin, û bi gelemperî di navbera 0.1-1mM de tê bikar anîn.Pîvana kêmtir dikare bandorên neyînî li ser mezinbûna hucreyê kêm bike û dikare cytotoxicity ji ber zêdebûna proteînên armanc kêm bike.Giraniyên bilindtir dibe ku bibe sedema bargiraniya metabolê ya hucreyê ya zêde, bandorê li mezinbûna hucreyê û karbidestiya derbirînê bike.
Awayê destnîşankirina hûrbûna çêtirîn dikare ev be ku meriv asta îfadeya proteîna armanc bi ceribandinên induction IPTG-ê di hûrguliyên cûda de binirxîne.Testên çandî yên piçûk dikarin bi karanîna rêzek hûrgelên IPTG (mînak 0.1 mM, 0.5 mM, 1 mM, hwd.) bêne kirin û bandora derbirînê di hûrgelên cihêreng de dikare bi tespîtkirina asta îfadeya proteîna armanc were nirxandin (mînak rojavayî blot an tespîtkirina floransê).Li gorî encamên ceribandinê, konsantasyona bi bandora herî baş a vegotinê wekî giraniya çêtirîn hate hilbijartin.
Digel vê yekê, hûn dikarin li wêjeya têkildar an ezmûna laboratîfên din jî binihêrin da ku di bin şert û mercên ceribandinê yên wekhev de rêzika giraniya IPTG-ya ku bi gelemperî tê bikar anîn fam bikin, û dûv re li gorî hewcedariyên ceribandinê xweşbîn bikin û sererast bikin.
Girîng e ku meriv bala xwe bidinê ku berhevoka çêtirîn dikare li gorî pergalên vegotinê yên cihêreng, proteînên armanc, û şertên ceribandinê ve girêdayî be, ji ber vê yekê çêtirîn e ku meriv li ser bingehek doz-bi-doz xweşbîn bike.
Bi kurtahî, DTT kargêrek kêmkerek bi gelemperî tête bikar anîn ku dikare were bikar anîn da ku bendên disulfîdê di proteînan û biomolekulên din de kêm bike û çalakiya enzîmê û aramiyê biparêze.Ew bi berfirehî di ceribandinên biyolojî û biyolojiya molekular de tê bikar anîn.
Dema şandinê: Sep-28-2023